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實驗結果判斷我有妙招:
1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!
產品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
莽草酸脫氫酶(SD)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6953 |
商品介紹:
測定意義: 莽草酸途徑是存在于植物、真菌和微生物中的一條重要的代謝途徑,莽草酸脫氫酶是莽草酸合成途徑中的關鍵酶。 測定原理: 莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產生NADPH,檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
2 ug pET-28a(+) pET-28a(+) 低溫運輸,-20℃保存
GVPC瓊脂基礎 GVPC Agar Base 100g
1瓶 7WCY1.0細胞株 7WCY1.0 低溫運輸和保存
1個 0.5mLDNA超濾離心管(150-250KD)
250mg Poly(I).Poly(C) 本產品是雙鏈多聚脫氧核糖核苷酸,一條鏈是I,一條鏈是C,為凍干粉狀態(tài),加水或TE緩沖液即可溶解,可用于誘導動物產生干擾素,還可以用于在EMSA中作為非特異性的競爭劑。 Poly(I).Poly(C)
250mL MES Buffer,1.0M,pH8.5 MES Buffer,1.0M,pH8.5 常溫保存
100次 植物種屬鑒定PCR Mix 8(質體 rpoC1) Plant DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存
2 ug pMAL-p5E pMAL-p5E 低溫運輸,-20℃保存
雙水解(綠膿桿菌) 20支
1瓶 RKO-AS45-1細胞株 RKO-AS45-1 低溫運輸和保存
液體雙抗增菌液 Liquid Double Anti Bacteria 250g
莽草酸脫氫酶(SD)測試盒微量法Donkey Anti-Guinea pig IgG/AP 堿性磷酸(AP)標記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlZnT-1 鋅轉運蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Jun B 活化蛋白激B抗體 規(guī)格: 0.1mlCCDC5 卷曲螺旋結構域蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/FITC FITC標記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.3mlRab27a RAM-11抗體 規(guī)格: 0.2ml
C4orf14 4號染色體開放閱讀框14抗體 規(guī)格: 0.2mlglypican 3/GPC3 磷脂酰基醇蛋白聚糖-3抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-IKK gamma (Ser376) 磷酸化KB抑制蛋白激γ抗體 規(guī)格: 0.1mlLGI1/ETL1 富含亮膠質瘤失活蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
CARD15 凋亡加強結構域蛋白15抗體 規(guī)格: 0.2mlDonkey Anti-Goat IgG/Cy7 Cy7標記的驢抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
CPI17 alpha 蛋酸激PKC/CPI-17抗體 規(guī)格: 0.1ml
FECH/Ferrochelatase 鐵螯合抗體 規(guī)格: 0.2ml
CDCA5/Sororin 細胞分裂周期相關蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-HER2(Tyr1112) 磷酸化HER2受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Metal ion transporter 擬南介金屬離子轉運蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
AMN1 細胞核重定位及紡錘體檢查點蛋白AMN1抗體 規(guī)格: 0.2ml
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