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肉桂酸4羥化酶(C4H)測(cè)試盒紫外分光光度法

簡要描述:肉桂酸4羥化酶(C4H)測(cè)試盒紫外分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:亮綠瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)Brilliant Green Agar250克分離培養(yǎng)梭菌進(jìn)口、國產(chǎn)Clostridium Enrichment Medium250克用于梭菌增菌培養(yǎng)哥倫比亞瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)Columbia Agar Medium250克營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的及溶血試驗(yàn),梭菌的檢測(cè)哥倫比亞4-甲基傘形酮葡糖苷酸進(jìn)口、國產(chǎn)Columbi

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2023-12-13
  • 訪  問  量:457

詳細(xì)介紹

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。

產(chǎn)品名稱:肉桂酸4羥化酶(C4H)測(cè)試盒紫外分光光度法

產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣

檢測(cè)方法:紫外分光光度法

產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6956

產(chǎn)品分類:其它系列
商品介紹:

測(cè)定意義:

C4H又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶,多存在于高等植物、酵母、菌類中,該酶催化肉桂酸羥化作用產(chǎn)生4-香豆酸鹽,是苯丙烷途徑中繼L-苯丙解氨酶之后的第二個(gè)關(guān)鍵酶。

測(cè)定原理:

C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸鹽和NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH生成速率,即可反映C4H活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

 

細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。

QQ截圖20220307153537.png 

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

吖啶黃素(5.0mg) Acridine flavin 5mg*5

100mg 5- 溴 -4- 氯 -3-  -β-D- 半乳糖苷 X-gal(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-Beta-D-Galactopyranoside) -20℃保存

500支 1.5 mL RNase-free 離心管  常溫

250 T 過氧化氫定量分析試劑盒(水兼容性) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

50mL Manganese Chloride Solution(溶液),1M  Manganese Chloride Solution,1M  常溫保存

0.5mL NTP溶液,10 mM NTP Solution,10 mM -20℃保存

2 ug pMAL- c4x pMAL- c4x 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

氣單胞菌添加劑  5支

1瓶 PC-12(未分化)細(xì)胞株 PC-12(未分化) 低溫運(yùn)輸和保存

疊氮鈉葡萄糖肉湯 Azide Dextrose Broth 250g

25g 十六烷基基 CTAB(Cetyltrimethylammonium Bromide) 室溫干燥保存

肉桂酸4羥化酶(C4H)測(cè)試盒紫外分光光度法COMMD10  銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體 規(guī)格: 0.2ml

Complement C3b alpha' chain  補(bǔ)體C3b-α鏈抗體 規(guī)格: 0.1ml

CYP17  細(xì)胞色素P450 17抗體 規(guī)格: 0.1ml

Kilham Rat Virus/KRV-VP1/KRV-VP2 (C-terminus)  基爾曼氏細(xì)小毒VP1/VP2抗體(大鼠潛在毒KRV)C端 1ml

Mouse Anti-Goat IgG/Bio  標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml

Ran/ARA24  雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體 規(guī)格: 0.2ml

CHFR  泛素連接蛋白CHFR抗體 規(guī)格: 0.2ml

Goat Anti-human IgG/AP  堿性磷酸(AP)標(biāo)記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

FOXF1  叉蛋白F1抗體 規(guī)格: 0.2ml

CHORDC1  含半胱和組豐富域蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit anti-mouse Kappa light chain/AP  堿性磷酸(AP)標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格: 0.1ml

VEGF-C  管內(nèi)皮生因子C型抗體 規(guī)格: 0.1ml 

注意事項(xiàng):

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?

對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 


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