簡要描述:無色桿菌屬通用PCR檢測試劑盒說明書上海帛科生物相關產品:CCL-149(大鼠肺泡上皮細胞)小鼠骨髓間充質干細胞(EGFP標記)SOC肉湯/SOC BrothBR250克國產/進口釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeU-937(
詳細介紹
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
無色桿菌屬通用PCR檢測試劑盒說明書 | Achromobacter spp.PCR | BK-P8748 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環(huán)擴增,擴增產物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基/5% Dextrose Broth Medium藥品細菌培養(yǎng),滴眼劑金黃色葡萄球菌培養(yǎng)等250克國產/進口
大鼠腸靜脈內皮細胞*培養(yǎng)基100mL
A9(小鼠下結締組織細胞)5×106cells/瓶×2
亮白曲霉 Aspergillus candidus小鼠成骨細胞*培養(yǎng)基
PANC-1, 人胰腺細胞豇豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium vigna
糖膽發(fā)酵管培養(yǎng)基/Lactose Bile Broth用于大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌的測定250克國產/進口
沙氏BHI瓊脂/沙氏腦心浸瓊脂/Sabouraud BHI Agar真菌檢測250克國產/進口
Lane Marker Loading Buffer(5x)/蛋白示蹤上樣緩沖(還原,5x)5ml5ml
CCL-149(大鼠肺泡上皮細胞)小鼠骨髓間充質干細胞(EGFP標記)
SOC肉湯/SOC BrothBR250克國產/進口
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeU-937(人組織細胞淋巴瘤細胞)
無色桿菌屬通用PCR檢測試劑盒說明書酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis核側耳 Pleurotus tuber-regium
冬擬多孔菌吳茱萸堿
枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilishDPSCs, 人前磨牙牙髓干細胞
HBL-100(人整合SV40基因的腺上皮細胞)煙曲霉 Aspergillus fumigatus
酸球菌霍氏亞種 Lactococcus lactis subsp. hordniae大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium melilotiLLC(小鼠肺細胞)
Saos-2,人成骨瘤細胞泡盛曲霉 Aspergillus awamori
戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus嗜熱脂肪芽胞桿菌 Bacillus thermophilus
毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipesHCG803/胃細胞
蘇云金芽胞桿菌蘇云金變種 Bacillus thuringeinsis subsp. thuringeinsis釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
中性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)黑曲霉 Aspergillus niger
泡盛曲霉 Aspergillus awamori大鼠卵巢上皮細胞*培養(yǎng)基
百脈根根瘤菌 Rhizobium loti酸球菌脂亞種 Lactococcus lactis subsp. cremoris
Molt-4/急性淋巴母細胞白血病細胞阿舒假囊酵母 Crebrothecium ashbyii
炭黑曲霉 Aspergillus carbonarius小鼠肝星形細胞*培養(yǎng)基
雪白小四孢菌 Microtetraspora niveoalba寡養(yǎng)單胞菌 Stenotrophomonas sp.
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
產品咨詢
聯(lián)系我們
上海帛科生物技術有限公司 公司地址:上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661 號24棟 技術支持:環(huán)保在線掃一掃 更多精彩
微信二維碼
網站二維碼