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簡(jiǎn)要描述:丙酮酸羧化酶(PC)測(cè)試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:M-TGE肉湯進(jìn)口、國產(chǎn)M-TGE Broth250克奶制品中濾膜細(xì)菌計(jì)數(shù)乙酸鹽瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)Acetate Agar250克細(xì)菌醋酸鹽試驗(yàn)無瓊脂腦心浸液進(jìn)口、國產(chǎn)BHI250克用于菌的培養(yǎng)七葉苷進(jìn)口、國產(chǎn)Esculin Medium250克生化實(shí)驗(yàn),用于細(xì)菌七葉苷水解試驗(yàn)
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注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:丙酮酸羧化酶(PC)測(cè)試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
檢測(cè)方法:微量法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6978
產(chǎn)品分類:糖異生系列
商品介紹:
測(cè)定意義: 丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase,PC,EC 6.4.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、霉菌和酵母的線粒體中,催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi,是糖異生過程的個(gè)限速酶,在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。 測(cè)定原理: PC催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi,蘋果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+,在340nm下測(cè)定NADH氧化速率,即可反映PC活性 需自備的儀器和用品: 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
50T 馬皰疹病毒1型PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
5mL 乳腺上皮細(xì)胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
250mL Antigen Retrieval Reagent,5X Antigen Retrieval Reagent,5X 常溫保存
50次 DNA電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)(250-15000bp) DNAMETER 4℃保存
2 ug pGET-4T-2 pGET-4T-2 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
肉湯I Broth medium 250g
1瓶 ES-2細(xì)胞株 ES-2 低溫運(yùn)輸和保存
含225ml LB1肉湯均質(zhì)袋 LB1 Broth 10個(gè)/包
500U Benzonase核酸 Benzonase Nuclease -20℃保存
500mL Potassium Phosphate Solution,0.2M, pH7.4. Potassium Phosphate Solution,0.2M, pH7.4. 常溫保存
5mL 新生溶液,50mg/mL Novobiocin Sodium Solution -20℃避光保存
丙酮酸羧化酶(PC)測(cè)試盒微量法MMP-9 基質(zhì)金屬蛋白-9抗體 規(guī)格: 0.1ml
PTRH2 Bcl-2轉(zhuǎn)錄抑制因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml
FAM168A/TCRP1 舌化療耐藥相關(guān)蛋白1 規(guī)格: 0.2ml
EP4R/Prostaglandin E Receptor EP4 前列素E受體蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-ELk1 (Ser389) 磷酸化細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體 規(guī)格: 0.1ml
HCCR2/LETMD1 宮頸原基因2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格: 0.1mlTSPAN6/TALLA-1/CD231 T細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞白相關(guān)抗原抗體 規(guī)格: 0.2ml
Jak3 蛋白酪激JAK-3抗體 規(guī)格: 0.1mlPAP2B 磷脂酸磷酸2b抗體 規(guī)格: 0.1ml
MCG10 RNA相關(guān)結(jié)合蛋白MCG10抗體 規(guī)格: 0.2mlRobo2 軸突導(dǎo)向受體蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Alpha 2 antiplasmin α2纖溶色素上皮衍生因子抗體 規(guī)格: 0.2mlccnb1ip1 周期蛋白B1結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-rat IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlp70 S6 kinase alpha 磷酸化核糖體p70 S6蛋白激抗體 規(guī)格: 0.1ml
C21ORF62 21號(hào)染色體開放閱讀框62抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-NFAT5 (Ser1197) 磷酸化活化T細(xì)胞核因子5蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
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