細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

公司細胞現(xiàn)貨供應，質量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關操作說明。公司產品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項：
1.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

CD3D & CD3E Others Cynomolgus 食蟹猴 CD3D & CD3E Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) UTI尿胰蛋白酶抑制劑1克生物技術級，220u/mg

人心臟成纖維細胞-心室HCF-av化銀 Silver iodide,99% 7783-96-2 10G 通用試劑

gpc-1細胞，人前列腺癌細胞 兔眼Tenon's囊成纖維細胞,RYTF細胞 大鼠背脊髓神經元RN-dsc甘油三丁醋酯;三酪醋甘油酯 Glycqrol tributyrctq;Butyrin;Tributyrin;Glycqryl tributyrctq; 1960-1-2

K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨細胞) 5×106cells/瓶×2TRITONX-114曲拉通 X-114蛋白組學級透明粘稠液體RTsigma

A-431(人表皮癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H131人角膜成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL 人羊膜細胞;HA放現(xiàn)菌素 DD
RN-h, 大鼠海馬趾神經元麥芽糖;淀粉糖D-(+)-Maltose monohydrate 質量規(guī)格：>92%,一水物

人皮膚成纖維細胞;HSAS4 人胎盤絨毛膜細胞*培養(yǎng)基 100mLONX-0914 (PR-957)ONX0914;PR957質量規(guī)格：>98%,immunoproteasome抑制劑

人牙周膜成纖維細胞RNAHPLR miRNA5 μgN-壬酰基-N-甲基葡萄糖胺(MEGA9)N-Nonanoyl-N-methylglucamine質量規(guī)格：>98%,BR

AK2 Others Human 人 AK2 / Adenylate kinase 2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 甲基纖維素(100000mPa.s)Methyl cellulose質量規(guī)格：粘度100000mPa.s

盤羊皮膚細胞;ASHS3甲基纖維素(4000 mPa.s)Methyl cellulose, middle viscosity質量規(guī)格：4000mPa.s,BR
大鼠肺上皮細胞16HBE(人支氣管上皮樣細胞) 5×106cells/瓶×2鹽酸林可霉素（標準品）質量規(guī)格：HPLC含量測定Lincomycin HCl

HTSMC-c 人類氣管平滑肌細胞(HTSMC) 500,000cells 原代肝實質細胞特制基礎培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/250/100ml三代甲狀腺素鈉鹽質量規(guī)格：>97.0%,BRLiothyronine

大隱靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)左旋肉堿鹽酸鹽(>98%,BR)質量規(guī)格：>98%,BRL-Carnitine

RBP4 Others Canine 狗 RBP4 人細胞裂解液 (陽性對照) 左旋肉堿1酸鹽(>99%,BR)質量規(guī)格：>99%,BRL-Carnitine L-tartrate

大鼠皮膚肥大細胞*培養(yǎng)基 100mL化(>98%,BR)質量規(guī)格：>98%,BRLead (II) iodide
細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的的*培養(yǎng)基。
4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，