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輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法

簡要描述:輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法的相關(guān)產(chǎn)品:6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒6磷酸葡糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒微量法6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒紫外分光光度法胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒微量法

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2024-01-02
  • 訪  問  量:1217

詳細(xì)介紹

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

產(chǎn)品名稱:輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
檢測方法:可見分光光度法
產(chǎn)品貨號:BK-01S6322
產(chǎn)品分類:
商品介紹:

測定意義
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要?dú)涫荏w,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時(shí),形成大量的ROS,同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細(xì)胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對細(xì)胞信號傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。
測定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進(jìn)一步采用MTT還原法檢測。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)!

1、樣本制備

① 組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取


② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

QQ截圖20220307153537.png

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
    1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
       ③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
       ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。

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甲醛脫氫酶(FDH)測試盒    甲醛脫氫酶(FDH)測試盒紫外分光光度法    紫外分光光度法    

乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒    乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法    微量法    

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6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒    6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒微量法    微量法    

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NADP蘋果酸酶(NADPME)測試盒    NADP蘋果酸酶(NADPME)測試盒微量法    微量法    

NADP蘋果酸酶(NADPME)測試盒    NADP蘋果酸酶(NADPME)測試盒紫外分光光度法    紫外分光光度法    

NAD蘋果酸酶(NADME)測試盒    NAD蘋果酸酶(NADME)測試盒微量法    微量法    

NAD蘋果酸酶(NADME)測試盒    NAD蘋果酸酶(NADME)測試盒紫外分光光度法    紫外分光光度法    

6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒    6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒微量法    微量法    

6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒    6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒紫外分光光度法    紫外分光光度法    

肌酸激酶(CK)測試盒    肌酸激酶(CK)測試盒微量法    微量法    

phospho-GEF H1 (Ser886)    磷酸化Rho鳥苷酸交換因子2抗體    

phospho-Afadin (Ser1721)    磷酸化絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體    

ARPC1A    肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型1A抗體    

ANKRD32    錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體    

ATXN7L3B    共濟(jì)失調(diào)7樣蛋白3B抗體    

POP1    感染性蛋白白1抗體    

ASB5    含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號抑制物盒蛋白家族5抗體    

ABP1    植物生長激素ABP1抗體    

phospho-ATF2 (Thr55)    磷酸化活化復(fù)制因子2抗體    

ADRA1B    alpha 1腎上腺素能受體B抗體    

Bcl-2 alpha    Bcl2 alpha蛋白抗體    

BAT5    白細(xì)胞抗原B相關(guān)轉(zhuǎn)錄蛋白5抗體    

BTBD1    BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白1(丙型肝炎病毒的NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8)抗體    

BCL7B    BCL7B蛋白抗體    

輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法BNC2    堿性核蛋白2(鋅指蛋白basonuclin2)抗體    

BCL7C    B細(xì)胞白血病/淋巴瘤蛋白7抗體    

BSCL2    先天性脂肪代謝障礙蛋白2抗體(常染色體顯性遺傳痙攣性截癱17)    

BTG1    B細(xì)胞遷移基因1抗體    

BEAN1    脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白BEAN1抗體    

注意事項(xiàng):

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?

對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

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